傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。

NR8383大鼠肺泡巨噬細胞

細胞別稱　NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983

背景介紹;NR8383 (正常大鼠，1983年)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞。細胞在gerbil肺細胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細胞克隆并亞克隆NR8383細胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細胞表現(xiàn)出巨噬細胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，Fc受體，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細胞響應(yīng)素，分泌TGF-β前體。在刺激下，TGF –β mRNA表達也上升。細胞對內(nèi)毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達50%。 即使達到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細胞相關(guān)活性。

生物安全等級;1

細胞規(guī)格;1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測;無

保藏機構(gòu);ATCC; CRL-2192

培養(yǎng)基;85%F12K+15% FBS+PS

培養(yǎng)條件;氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件無血清凍存液，液氮儲

發(fā)貨方式復(fù)蘇發(fā)貨（免運輸費用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

特別說明以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主

二、懸浮細胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細胞碎片的情況下）。當在顯微鏡下觀察到懸浮細胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細胞懸液變黃）時，即可進行傳代。

（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻或預(yù)實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實驗完成。

（4）消化細胞時應(yīng)避免消化時間過短導(dǎo)致消化不收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導(dǎo)致細胞成團塊樣絮狀游離，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度。

（5）細胞離心的時候應(yīng)避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后，應(yīng)先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)毎麚p傷小，可以提高細胞活率。

（6）吹打細胞時應(yīng)盡量避免細胞的產(chǎn)生，以免損傷細胞，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

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