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    傘枝梨頭霉PCR試劑盒的設(shè)計引物應(yīng)遵循哪些原則

    點擊次數(shù):1172  更新時間:2020-11-25
       傘枝梨頭霉PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有的成分。現(xiàn)代食品加工工藝改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。
     
      特點:
      1.即開即用,用戶只需要提供病毒DNA模板。
      2.引物經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性比使用世界動物衛(wèi)生組織推薦的引物高100倍以上。
      3.特異性高,引物是根據(jù)保守的vp72基因設(shè)計。
      4..提供陽性對照,便于分析實驗結(jié)果。
      5.PCRmix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。本試劑盒足夠做40μL體系的PCR50次,只能用于科研。
     
      傘枝梨頭霉PCR試劑盒設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
     ?、僖镩L度:15-30bp,常用為20bp左右。
      ②引物擴增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
     ?、垡飰A基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
     ?、鼙苊庖飪?nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
     ?、菀?’端的堿基,特別是倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
      ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子很有好處。
      ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
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