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    傘枝梨頭霉PCR試劑盒的模板準備工作和注意事項

    點擊次數(shù):842次  更新時間:2020-01-18
       傘枝梨頭霉PCR試劑盒是指將RNA的反轉錄和cDNA的聚合酶鏈式擴增相結合的技術。利用逆轉錄酶將RNA逆轉錄成cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。常見應用包括基因檢測、轉錄物變異檢測,以及克隆和測序用cDNA模板制備。
     
      傘枝梨頭霉PCR試劑盒的模板準備:
      根據(jù)不同的樣本類型,按照相應的樣本用量。
      ·將樣本加入到1.5ml離心管中,加入體積的SolutionA,渦旋震蕩20s,并按照處理方法,室溫靜置3-5min,或95℃金屬浴振蕩孵育3-5min。
      樣本充分裂解后(95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復室溫),加入體積的SolutionB,并渦旋震蕩30s,12000rpm離心2min,上清即為模板DNA。
      處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗,請于4℃保存,如不能立即進行下一步試驗,請于-20℃保存。
     
      傘枝梨頭霉PCR試劑盒的注意事項:
      1.建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
      2.試劑BufferAL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
      3.電泳檢測時,切勿使用含有SDS的LoadingBuffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
      4.建議擴增片段長度1kb以內(nèi),以便擴增效率佳。
      5.為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
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